阅读次数：1062 发布时间：2015/6/25 9:08:54
标准品是我公司热销并主营的产品系列之一，很多需要用其做检测实验的客户致电我公司。标准品的制备是非常复杂的问题，也是标记免疫分析中比较难于制备的一个成分。下面是酶联免疫学第三方检测中心为大家带来的最新技术：实验室标准品的制备方法解析大全。
一、基质的制备
如前所述，作为标准品的介质(基质)成分应与被测样品相同。对大多数用于测定血清中某物质的标准品，应用不含被测物质的零血清制备，以求反应的介质环境相当。但有时零值血清的制备十分困难，所以有些标准品用适当的缓冲液制备，并在缓冲液中加入一定量的载体蛋白(一般用1%～2%的牛血清白蛋白)，以便使其与样品的介质环境相近。
零值血清的制备方法有：
1.吸附法：血清中小分子物质如三碘甲状腺原氨酸(T3)、甲状腺素(T4)等，可用活性炭吸附去除。这种方法简便，但待测物质难以清除干净，而且大分子活性物质不能用此法进行制备。
2.反复冻融法：对大分子活性物质可选用低值血清，经反复冻融使被测物质失活。用这种方法可使某些蛋白类激素大部分失活，但也难以得到真正的零值血清。
3.亲和层析法：用特异性抗体制备亲和层析柱，用以吸附被测抗原。用这种方法可以得到高质量的零值血清，但本法比较复杂而且成本也高。
二、标准物纯品的选择
应选择高化学纯和高免疫纯的纯品作标准品。其中免疫纯尤为重要，在标准品中不应含有与被测物质有交叉反应的物质。
三、标准品的制备
先用零值血清配置高浓度的标准品，然后根据实验系统的要求，用零值血清将高值血清稀释至应有的浓度，制成符合预定要求的，由不同浓度组成的系列标准品。
四、标准品的鉴定
1.免疫活性的鉴定：选用高特异性的抗血清分别作公认标准品(如WHO的国际参考品或国家标准品)的待鉴定标准品的剂量反应曲线，并观察两条曲线的平行性。如两条剂量反应曲线平行，说明两种物质对同一抗体有相同的亲和力，即二者是同质性物质。如两条剂量反应曲线不平行，说明两种物质具有异质性，因而这一待鉴定的标准品是不能使用的。
2.浓度的标定：用已鉴定过的，免疫活性合格的标准品，与公认的标准品作浓度相同的剂量反应曲线。此时，两条剂量反应曲线应该是基本重合的。如果两者平行但不重合，则取两条剂量反应曲线的50%结合处的相应剂量(ED50)计算二者的换算系数，然后调整待鉴定标准品的浓度，直至使两条剂量反应曲线完全或基本重合为止。
五、标准品的计量
许多小分子抗原或半抗原已能得到纯品或进行合成，它们对作为标准品的要求可以得到基本的满足，其计量多直接用单位体积中的重量表示，如mg/ml、ng/ml、pg/ml等。最近WHO推荐用质量单位取代重量单位，即mol/L、mmol/L、或nmol/L等。对大分子的活性物质则比较复杂。由于得不到绝对的纯品，故很难直接用单位体积中的重量或单位体积中的质量计量。因此，常用该物质的生物活性单位表示，如IU/L、mIU/L等。
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原创作者：上海恒远生物科技有限公司
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