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解决方案

夹心法检测:白介素8(il-8)Elisa试剂盒技术分析

阅读次数:798    发布时间:2016/4/13 10:38:48

我司提供白细胞介素8(IL-8)ELISA检测试剂盒周期长效价稳定,采用纯进口原装抗体现包被生产,质量有保证,白细胞介素8(IL-8)ELISA检测试剂盒技术更全面。我司提供专业免费酶免代测服务,用于快速检测测定血清、血浆及相关液体等样本,一周内可出结果,效果稳定、灵敏度高、操作简单、易保存,可提供全程技术指导。
白细胞介素8(IL-8)ELISA检测试剂盒这些雷区请注意:
一、建议所有标准品、样本都做双份检测。
二、严格按照说明书的操作进行,试验结果判定必须以酶标仪读数为准.。
三、为避免交叉污染,要避免重复使用手中的吸头和封板膜。
四、不用的其它试剂应包装好或盖好。不同批号的试剂不要混用。保质前使用。
五、底物B对光敏感,避免长时间暴露于光下。
本章小编为您解析关于使用夹心法测白介素的一些注意问题。
Il-8是一种分子量为8~10kD的多肽,对嗜中性粒细胞,T淋巴细胞、嗜硷性粒细胞具有趋化作用,并可激活嗜中性粒细胞,是一种重要的炎症介质。在严重感染病人的血清中、炎症局部渗出液中都可检测到高水平的IL-8.此外,近年来的研究表明,IL-8可能与各种组织缺血后再灌注损伤的发生有关。我们采用两株自制的单克隆抗体建立了夹心法ELISA用于检测IL-8,敏感性可达156Pg/ml,操作简单,重复性良好,可用于IL-8的基础和临床研究。

一、原理

采用两株识别不同表位的抗IL-8单克隆抗体,其中一株(4D7)作为包被抗体,以识别和结合待检标本中的IL-8,另一株作为酶标抗体,与结合于包被抗体的IL-8的另一个表位结合并催化底物显色。

二、试剂器材

1. 试剂盒提供包被抗体、酶标抗体、标准品,底物(ABTS)、96孔ELISA板。

2. 包被缓冲液、PBS、底物缓冲液配制同常规ELISA法。

三、操作步骤

1. 包被:pH9.5 碳酸盐缓液稀释4D7单克隆抗体粗提γ球蛋白至1μg/ml,加入96孔板,100μl/孔,放4℃,36小时。

2. 封闭:0.1%吐温PBS(Buffer A)冲洗96孔板三次,加3%BSA Buffer A(Buffer B)200μl/孔,放37℃,1小时。

3. 加待检样品:Buffer A 冲洗96孔板三次,加待检样品及Buffer B 稀释的标准品100μl/孔,放37℃,3小时。

4. 加酶标抗体:Buffer A冲洗96孔板五次,3%PEG Buffer A稀释酶标抗体至1∶800,加入96孔板,100μl/孔,放37℃,1小时。

5. 显色:Buffer A冲洗96孔板五次,pH5.4柠檬酸缓冲液溶解底物(ABTS),0.2mg/ml,加3%H2O2,2μl/ml,加入96孔板,100μ/孔,室温下或37℃显色。

四、注意事项

1. 待检标本如为血清,应采用一次性容器,血液采集后尽快(6小时以内)分离血清。

2. 封闭液或抗体稀释液应新鲜配制或冻存。
上海恒远生物始终如一“高品质、低价格、快发货”,公司成立多年,诚信经营,长期供应各种生物试剂、抗体、ELISA试剂盒、细胞因子等白细胞介素8(IL-8)ELISA检测试剂盒实验耗材,已经成为国内众多科研院所和企事业单位的指定试剂供应商。
 

原创作者:上海恒远生物科技有限公司

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