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实验时ELISA竞争法检测抗-HBe

阅读次数:285    发布时间:2023/5/9 9:48:17

    ELISA方法学在实验中运用的很广泛,5个实验3个实验都是用ELISA法检测的,对于ELISA实验中也是有多种方法学可以选择的,今天我们着重的讲解下ELISA实验中竞争法检测抗-HBe,先来了解一下实验原理吧!


    一、实验原理
    用抗-HBe包被固相载体后,同时加被检血清和合适滴度中和试剂HBeAg,若被检血清中含有抗-HBe,则与包被抗-HBe竞争结合HBeAg,被检标本中抗-HBe越多,HBeAg被结合越多,而与包被抗-HBe结合就越少,加底物后显色就越浅;反之越深。
 
    二、主要试剂与器材
    ELISA试剂盒:内含已包被抗-HBe板条、HRP-抗HBe溶液、中和试剂HBeAg溶液、阳性和阴性对照血清,底物溶液(A液、B液)、终止液、洗涤液。

    三、结果分析
    1.P/N≤0.3为阳性。P/N>0.3为阴性。
    2.P/N=待检血清OD值/阴性对照OD值。

    四、注意事项
    1.试剂置2-4℃保存。取用时应先置室温平衡。干包被板条须密封防潮,zui好冻存,取用后余者及时封存。
    2.恰当选好HBeAg的浓度。
    3.试剂用前应摇匀。

    五、操作步骤
    1.加样:取出干包板条,按编号顺序分别加50μl待检血清、阴性对照血清和阳性对照血清于相应孔中。设空白对照孔,除此孔外,每孔加HBeAg50μl、HRP-抗HBe50μl,振荡混匀后,置43℃(或37℃)温育1h。
    2.洗涤:甩去孔内液体,用洗涤液注满各孔,静置20s,甩干。如此重复洗涤4次,在吸水纸上拍干。
    3.显色:每孔加显色剂A、显色剂B各50μl,振荡混匀后置37℃避光显色10-15min。
    4.终止:每孔加终止液50μl,振荡混匀。
    5.酶标仪检测:选用450nm波长,用空白孔调零之后测各孔OD值。

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