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斑马鱼晚期糖基化终末产物(AGEs)ELISA实验操作手册

阅读次数:181    发布时间:2023/11/1 10:55:18

AGES就是糖基化终末产物的英文简写,它是非酶糖基化反应(Maillard反应)的终末产物。是指蛋白质、脂质或核酸等大分子在没有酶参与的条件下,自发的与葡萄糖或其他还原单糖反应所生成的稳定的共价加成物。本试剂盒用于测定斑马鱼血清,血浆及相关液体样本中晚期糖基化终末产物(AGEs)含量。那么在ELISA实验中有哪些注意事项呢,恒远生物小编为大家总结ELISA实验操作注意事项。
 
一、实验原理
本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中斑马鱼晚期糖基化终末产物(AGEs)水平。用纯化的斑马鱼晚期糖基化终末产物(AGEs)抗体包被微孔板,制成固相抗体,往包被单抗的微孔中依次加入晚期糖基化终末产物(AGEs),再与HRP标记的晚期糖基化终末产物(AGEs)抗体结合,形成抗体-抗原-酶标抗体复合物,经过彻底洗涤后加底物TMB显色。TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的晚期糖基化终末产物(AGEs)呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度(OD值),通过标准曲线计算样品中斑马鱼晚期糖基化终末产物(AGEs)浓度。 
 
二、标本要求
1.标本采集后尽早进行提取,提取按相关文献进行,提取后应尽快进行实验。若不能马上进行试验,可将标本放于-20℃保存,但应避免反复冻融
2.不能检测含NaN3的样品,因NaN3抑制辣根过氧化物酶的(HRP)活性。
 
三、注意事项
1.试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡15-30分钟后方可使用,酶标包被板开封后如未用完,板条应装入密封袋中保存。
2.浓洗涤液可能会有结晶析出,稀释时可在水浴中加温助溶,洗涤时不影响结果。
3.各步加样均应使用加样器,并经常校对其准确性,以避免试验误差。一次加样时间最好控制在5分钟内,如标本数量多,推荐使用排枪加样。
4.请每次测定的同时做标准曲线,最好做复孔。如标本中待测物质含量过高(样本OD值大于标准品孔第一孔的OD值),请先用样品稀释液稀释一定倍数(n倍)后再测定,计算时请最后乘以总稀释倍数(×n×5)。
5.封板膜只限一次性使用,以避免交叉污染。
6.底物请避光保存。
7.严格按照说明书的操作进行,试验结果判定必须以酶标仪读数为准.
8.所有样品,洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理。
9.本试剂不同批号组分不得混用。
 
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