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  • 产品名称:T-2 毒素ELISA试剂盒技术指导
  • 产品型号:
  • 产品产地:美国
  • 访问次数:1424
  • 产品价格:电议
  • 简介内容:T-2 毒素ELISA试剂盒技术指导用于玉米,玉米粉,玉米胚芽粉,玉米蛋白粉,玉米/大豆混合物中 T-2 毒素的定量检测。
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详细内容

T-2 毒素ELISA试剂盒技术指导

 本试剂盒仅供研究使用。
1使用目的:
本试剂盒用于玉米,玉米粉,玉米胚芽粉,玉米蛋白粉,玉米/大豆混合物中 T-2 毒素的定量检测。
2实验原理
本试剂盒采用直接竞争 ELISA 方法,在微孔板包被有 T-2 毒素偶联抗原,加入 T-2 毒素标准品或样品,游离 T-2 毒素与微孔条上预包被的 T-2 毒素偶联抗原互相竞争抗 T-2 毒素抗体酶标记物,用 TMB 底物显色,加入终止液后颜色由蓝色变为黄色,用酶标仪在 450nm 波长下进行检测,吸光值与样品中 T-2 毒素含量成反比,通过标准曲线计算样品中 T-2 毒素的含量。
3试剂盒组成
3.1 预包被的 T-2 毒素偶联抗原的可拆酶标板:1 块(12 孔×8 条)。
3.2 T-2 毒素标准品:6 瓶(1ml/瓶),含量分别是:0 ng/ml,0.01 ng/ml,0.02 ng/ml,0.04 ng/ml,0.08 ng/ml,0.16 ng/ml
3.3 抗 T-2 毒素抗体酶结合物:1 瓶(6ml)。
3.4 显色液 A:1 瓶(6ml)。
3.5 显色液 B:1 瓶(6ml)。
3.6 终止液:1 瓶(6ml),2M 硫酸。
3.7 样本稀释液:1 瓶(10×,6ml),用于样品稀释用。
3.8 浓缩洗涤液:1 瓶(20×,20ml),用于洗板。
3.9 说明书一份。
4需要而未提供的材料
4.1 设备
4.1.1波长450nm酶标仪。
4.1.2粉碎机。
4.1.3量筒。
4.1.4振荡器。
4.1.5漏斗。
4.1.6Whatman No 1或相当的滤纸。
4.1.7微量移液器。
4.2 试剂
4.2.1去离子水或蒸馏水。
4.2.2 甲醇。
5贮存
5.1 试剂盒贮存于2~8℃,切勿冷冻
5.2 未用完的微孔板应该密封干燥保存
6注意事项
6.1 使用试剂盒前请仔细阅读说明书。
6.2 不要使用过期试剂盒。
6.3 试剂盒使用前,将试剂恢复至室温(25±2℃),建议至少回温2小时。
6.4 标准品中含有T-2毒素,使用时应特别注意,操作时应带手套。
6.5 终止液中含有硫酸,使用时防止灼伤皮肤及腐蚀衣物。
6.6 不同标准品、样品所用吸头不能混用,否则会影响试验结果。
6.7 不同批号试剂盒中的试剂不得混用;不同标准品、样品所用吸头不得混用,否则会影响
实验结果。
6.8 稀释样本时必须用本试剂盒中的样本稀释液,否则会影响实验结果
6.9 混合试剂时应避免起泡。
7工作液准备
7.1 T-2毒素标准品溶液:0ng/ml,0.01ng/ml,0.02 ng/ml,0.04 ng/ml,0.08 ng/ml,0.16 ng/ml
7.2 浓缩洗涤液:用蒸馏水按1:20(1+19)稀释备用
7.3 样本稀释液:用蒸馏水按1:10(1+9)稀释备用
7.3 显色剂:已备用,避免光线直照
7.4 反应终止液:已备用
8样品处理程序(样品在提取过程中,要严格按说明书操作,提取过程中应准确稀释,否则会出现结果不准确,样品应当保存在阴凉避光之处及冷藏保存)
8.1取10g粉碎的样品,加 20ml 70%甲醇溶液
8.2强力振荡3分钟
8.3用Whatman No 1滤纸过滤
8.4取25µl处理后的样品,加入25µl样本稀释液于反应孔中(样本稀释倍数为2)
9酶免分析步骤
9.1 实验须知
9.1.1 实验开始前请将所有试剂于盒外充分恢复至室温(25±2℃),时间约2小时。回温至室温(25±2℃)后再取出微孔条,多余的微孔条重新密封立即于2~8℃干燥保存
注:一定保证回温充分,否则影响检测的精确度和准确度。
9.1.2 使用后请立即将试剂放回2~8℃保存
9.1.3 请不要改变分析程序
9.1.4 请使用精确的微量移液器
9.1.5 操作一旦开始,请不要中断任何程序
9.1.6 ELISA结果的可重复性极大程度的取决于操作程序,请严格按照要求操作
9.1.7 为避免交叉污染,每个标准品和样品均应使用不同的吸头加样
9.1.8 加样时请勿让吸头接触微孔中的溶液或内表面
9.2 分析步骤
9.2.1 预先进行编号,标记B0、标准品和样品的位置,推荐进行双孔检测
9.2.2 取所需数量的微孔(微孔条可拆),将多余板条重新密封并立即放回2~8℃保存
9.2.3 样品稀释液(10×)、浓缩洗涤液(20×)稀释成工作液(蒸馏水或去离子水稀释)
9.2.4 在B0孔中加入50µl0.0 ng/ ml标准品溶液
9.2.5 在各标准孔中加入50µl的标准品溶液
9.2.6 在各样品孔中加入50µl样品溶液
9.2.7 在所有孔中加入50µl的抗T-2毒素抗体酶结合物
9.2.8 轻轻晃动反应板几秒钟。
9.3 37℃温浴30min (温浴过程中不时轻拍反应板,可以减少双孔误差)
9.3.1 甩掉孔中液体,用洗液洗涤微孔板5次,最后一次应在吸水纸上拍打以完全除去孔中液体。
9.4 反应
9.4.1 洗涤程序完成后,立即用微量移液器在每个微孔中先加入50µl显色液A,再加 50µl显色液B;轻微晃动反应板使之彻底混匀
9.4.2 37℃温浴10min
9.4.3 每孔中加入50µl终止液,混匀
9.4.4 在450nm下检测吸光度,结果在5min内读取。
10结果计算
10.1定量分析
10.1.1所获得的每个浓度标准溶液和样本吸光度值的平均值(B)除以第一个标准(0标准)的吸光度值(B0)再乘以100%,即百分吸光度值。B—标准溶液或样本溶液的平均吸光度值B0—0µg/L标准溶液的平均吸光度值
10.1.2以T-2毒素浓度的对数值为X轴,百分吸光度值为Y轴,绘制标准曲线图。根据样品百分吸光度值,可从曲线上得到对应点的横坐标,即为T-2毒素浓度的对数值,求得反对数即为测定液中T-2毒素浓度C(ng/ml)
10.1.3由于样品经过了预先稀释,因此根据标准曲线所得出的样品浓度一定要再乘以其稀释倍数。
10.2 半定量测定
10.1.1目测半定量测定:首先选择一个适当的标准液与样品同运行,根据样品与标准品吸光度值的高低比较,判断样品浓度值是小于还是大于标准值。
10.1.2仪器半定量测定:首先选择一个适当的标准液与样品同运行,根据样品与标准品颜色深浅比较,判断样品浓度值是小于还是大于标准值。
11特异性
物质 交叉反应
T-2毒素——————————100%
12试剂盒参数
本试剂盒检测下限为0.01ng/ml B0吸光度最佳值应大于1.0
试剂盒吸光度板内误差小于8%,板间误差小于15%。
用本说明书提供的组织样本提取方法回收率大于80%。
13标准曲线模式(仅供参考)
试剂盒提供的标准曲线范围为0.01ng/ml~0.16ng/ml。
14分析限制
本试剂盒检测为阳性的样品应该用另一种方法如HPLC或GC/MS加以确证。

原创作者:上海恒远生物科技有限公司

标签:T-2 毒素 ELISA试剂盒免费代测 

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