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一、“兔血管生成素2(ANG-2)ELISA试剂盒”简介
操作过程中可能出现的问题和解决方法 | ||
问题 | 可能原因 | 解决方法 |
显色淡,灵敏度偏低 | 1、试剂盒在运输途中时间太长,温度太高 | 尽量缩短运输时间,夏季应放冰块降温 |
2、试剂盒未充分平衡 | 试剂盒从2~8℃冰箱取出后打开盒盖,于室温平衡至少20分钟,确保所有试剂已平衡至室温(约25℃)。 | |
3、培养箱温度不足37℃ | 注意培养箱温度,放入反应板后尽量减少开启次数以免影响温度恒定,非隔水式培养箱尤其应注意 | |
4、保温时间不足 | 校正定时钟准确定时 | |
5、洗涤时冲击力太大、浸泡时间过长、洗涤次数增加 | 按说明书要求保留洗涤时间,准确记住洗涤次数 | |
6、移液器吸液量不足,吸嘴内壁挂水太多或内壁不清洁 | 校正移液器,吸嘴要配套,装吸嘴时要紧密,吸嘴内壁要清洁,最好一次性使用 | |
7、蒸馏水水质有问题 | 使用新鲜合格的蒸馏水 | |
8、底物作用时间不足 | 准确定时 | |
背景深,全部呈有色 | 1、洗涤不充分,洗后未拍干,样品中其它成分残留或酶标记物残留 | 浓缩洗液准确配制;10倍浓缩洗涤液如有结晶则应让结晶于室温全部溶解后再量取稀释;充分洗涤,彻底拍干。加样或加酶拍板的滤纸应弃去不用,不要反复使用,否则易造成污染 |
2、样品污染 | 样品应新鲜采集,或低温保存,防止污染 | |
3、培养箱温度超过37℃或反应时间过长 | 调整培养箱温度,准确定时 | |
4、吸嘴重复使用,未洗净或消毒不彻底 | 吸嘴尽可能一次性使用 | |
5、蒸馏水被污染 | 使用新鲜蒸馏水 | |
6、酶等试剂混用 | 不同批号试剂勿混用 | |
7、一次实验的标本量过多,加样时间太长,导致实际反应时间延长 | 合理安排实验,避免几块酶标板同时加样 | |
重复性不佳 | 1、样品数量多少不一,加样时间有长有短 | 重复某一样品时,加样时间尽可能与第一次接近 |
2、保温时间不一致,洗涤条件不一致,操作人员不一致 | 重复测定标本,操作条件、人员等应尽可能与上次保持一致,以排除这些因素造成的不一致的可能性 | |
3、加样量不一致 | 样品稀释前应充分混匀,尽可能使用同一移液器并装紧吸嘴 | |
出现白板,阳性对照不显色 | 显色液变质 | 更换新的显色液 |
洗涤液配制有误 | 请按说明书所示稀释倍数配制 | |
未加酶结合物而认为已加入 | 注意不要漏加 | |
终止液误作洗涤液稀释或当底物液使用 | 每次加液前均应看清标签 |
原创作者:上海恒远生物科技有限公司
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