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ELISA实验之"OD值"?

阅读次数:286    发布时间:2024/5/10 9:36:55

“OD值”这个概念想必做实验的各位小伙伴们都不陌生,从判断提取核酸的质量及浓度,到BCA蛋白定量进行蛋白定量,又或者是ELISA实验检测目的蛋白含量,这些常用的基础实验都需要检测样品的“OD值”,但是,“OD值”到底是什么,我们在测量“OD值”的时候又有哪些需要注意的问题,今天就让小编给小伙伴们好好说道说道。什么是“OD”值?


OD全称optical density,也就是光密度,也可以称为吸光度。吸光度指的是利用物质特有的吸收光谱,来鉴别物质或者测定物质的含量,也就是将一束特定波长的光通过被检测物,被检测物可以将光吸收掉一部分,通过吸光度计算被检测物的浓度。一般被检测物浓度越高,吸光度的值就会越高。实验中也是利用“OD值”和被检测物的浓度之间的关系来根据吸光度。

测量“OD值”注意事项:
最需要注意的就是测量时的光波长。吸光度利用的是物质特有的吸收光谱,实际操作中我们需要注意的最关键的也是这一点,不同物质的吸收光谱不同,最大吸收峰的波长也不同,为了达到最好的测量效果,一般来讲,我们需要在待测物质的最大吸收波长处来检测其“OD值”。例如,核酸在260nm波长处光吸收最大,而蛋白和酚类物质则在280nm波长处光吸收最大;BCA法检测蛋白含量时,显色反应后,溶液由浅绿色变为紫色,此时在560nm处有最大光吸收值;TMB法显色的ELISA实验,在加入终止液后溶液由蓝色变为黄色,在450nm处有最大光吸收。

对于测量得到的待测样本“OD值”还需要进行换算才可以得到最终的浓度,有很多小伙伴往往在这一步出现错误,功亏一篑。需要注意的地方也比较简单,就是根据对应试剂盒的说明书,采用推荐的曲线拟合方式进行拟合,拟合后需要看一下拟合曲线的R2值,约接近1证明曲线拟合度越高,结果越可信。如果R2值较低,则需要检查是否出现标准品稀释问题或实验操作出现失误。

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原创作者:上海恒远生物科技有限公司

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