阅读次数：3580 发布时间：2018/3/30 9:50:39
近期恒远小编收到不少同学们实验中出现的各种问题。比如加样不准，重复性不好，标准曲线不“标准”，小编在此建议大家，尤其是第一次做实验的同学们，正式实验之前可先做预实验，在预实验中确定稀释倍数，节约又高效。今天恒远小编就带新同学们简单了解下ELISA试剂盒总是不成功的原因有哪些及对应的解决方法！
ELISA原理：
ELISA是将可溶性的抗原或抗体结合到聚苯乙烯等固相载体上，利用抗原抗体结合专一性进行免疫反应的定性和定量检测方法。ELISA素来以灵敏度较高、特异性较好的特点在临床上得到了广泛的应用，它看似简单，但操作中的各个环节对该实验的结果影响较大，如有差错可能会造成实验的失败。
ELISA包括三种类型：间接法、夹心法和竞争性法。其中间接法和夹心法较常用。
ELISA试剂盒总是不成功的原因有哪些及对应的解决方法！
问题一：标准曲线梯度差，测定的重复性差。
可能原因：
1.操作误差较大，洗液或加液不准，或酶标板不均一；
2.加样过快，孔间发生污染；加错样本；加样本及试剂时，加在孔壁；不同批号试剂盒中组分混用；温育时间、洗板、显色时间不一致；
3.孔内污染杂物，血清标本未完全凝固即加入，反应孔内出现纤维蛋白凝固或残留血细胞，易出现假阳性等。
解决方法：
1.加样量多少不一，操作时间长短不一。重复同一样本时，加样量与加样时间理应相同，同时也应注意移液器的校准。加样后可轻微晃动酶标板使反应液充分混合。
2.样本应保证一致、无污染，并应该由同一名操作人员进行操作。
3.加强操作规范化，使用质量好的酶标板。
问题二：不显色或显色值低。
可能原因：
1.底物配制问题或底物已失效；
2.酶标抗体中酶失活或效率低或漏加酶标抗体；
3.抗原抗体不匹配；
4.稀释度太高；
5.洗板次数过多，洗涤冲击力太大。
解决方法：
1.使用高效底物；
2.使用商品化高效的酶标抗体；
3.选择优质的抗原抗体对；
4.降低稀释度；
5.按要求洗板，减小洗涤冲击力。
上海恒远生物寄语：
做科研想要得到理想的结果并不是都能一步做成，每一步细小的错误都会导致实验的失败，但是不能灰心哦，您应当总结每一次失败的教训，不断与老师交流经验和身边的同学相互学习。从中分析原因，不要放过每一个细小的发现，因为那可能是实验成功的关键。此外科研不是儿戏即使步步为营也很难一次使研究得到理想的结果。我们应当坚守科学严谨的态度，坚持不懈不能轻易放弃！当然，选择恒远生物优质elisa试剂盒即可享受技术指导及免费代测服务。是您身边的科研小伙伴哦！
原创作者：上海恒远生物科技有限公司
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