技术服务专区
酶联免疫(ELISA)代测服务
ELISA(酶联接免疫吸附反应分析)是以免疫学反应为基础,将抗原、抗体的特异性反应与酶对底物的..
组织形态学实验技术服务
组织包埋,切片,免疫组化,免疫荧光,偏振光,原位杂交,凋亡,常规染色,特殊染色,组织形态图..
Western Blot实验技术服务
Western Blot是利用抗原抗体的免疫反应,先将蛋白通过SDS-PAGE凝胶电泳分离开,再利用电场力的作..
解决方案

抗体滴定的方法与操作步骤

阅读次数:1866    发布时间:2021/3/30 14:10:50

        抗体滴定(antibody titration)就是确定合适的抗体用量和抗体浓度,以实现阳性信号尽可能强,而阴性信号尽可能低即得到合适的S/N(信噪比值)。一般抗体供应商都会推荐抗体使用量, 如Test包装抗体。但为了达到很棒的实验效果及节省抗体,我们则需要自己做滴定,尤其在多指标流式检测实验中,抗体滴定就更加重要了。


        具体的抗体滴定步骤如下:

        以APC-CD49b(BioLegend  Cat#108909)抗体为例,浓度为0.2mg/ml,推荐抗体使用浓度为 ≤0.25 μg/100ul 。起始滴定浓度一般为推荐浓度的两倍(即起始浓度为0.5ug/100ul),做8次2倍稀释。假设用100ul体积,在首孔/管的97.5ul稀释液里加入2.5ul抗体,然后从首孔/管取出50ul加入第二孔/管的50ul稀释液中,从第二孔/管中取出50ul加入至第三孔/管的50ul稀释液,依次倍比稀释,最后,向每个孔中加入50ul细胞,注意整个操作,抗体要充分混匀。

        抗体滴定并不是以抗体量/细胞数来表示的,滴定的是抗体浓度(如ug/ml),其与细胞量在标记10万和1000万个细胞范围内相关性不大。如果您准备用于标记1亿个细胞,千万不要将抗体用量也增加100倍。通常只需增加2-5倍即可,有时甚至不用增加用量。如果您经常标记1亿个细胞(如分选细胞时),做2-3个点的快速滴定是很有用的。同样的道理,如果您只标记5万个细胞,那么也千万不要减少抗体用量。记住,与抗体用量相关的指标是浓度(抗体量/染色体积)。这意味着,如果您是100ul的体积下进行滴定抗体,而染色时使用1ml的体积,那么你就需要用10倍的抗体量。同样的道理,如果您在200ul体积下进行滴定,而染色时使用50ul体积,那么您就需要用1/4的抗体量。


        染色之后,一般确定SI(染色指数)或S/N(信噪比)z高的浓度,但有时也需要考虑一下抗体用量。


        上海恒远生物科技有限公司感谢多年以来各位老师对本公司的大力支持,希望通过我们的不懈努力能为科研事业做出更大的贡献!公司为您提供实验室操作试剂包括elisa试剂盒,胎牛血清,培养基,对照品,抗体,标准品,生化试剂等。

原创作者:上海恒远生物科技有限公司

品质保证

防伪易碎商标贴,四招助您分辨真假。

送货保障

产品均有现货,多家快递公司合作准时到达。

售后服务

产品及实验问题,提供技术支持保障。

  • 电话:18221656311
  • 手机:18221656311
  • 联系人:钱经理

上海恒远免疫学第三方检测中心

微信扫描二维码,参与上海恒远活动,

劲爆优惠触手可得!

主营产品:

酶联免疫试剂盒,酶联免疫实验代测,elisa试剂盒,原装elisa试剂盒,elisa检测试剂盒,进口血清

公司名称:上海恒远生物科技有限公司 公司地址:上海市松江临港科技城汉桥文化科技园B座 邮政编码:201615 邮箱:2885617636@qq.com

联系人:钱经理 联系电话:18221656311 ICP备案号: 沪ICP备11004148号-22 技术支持:阿仪网

娇娇

小李

小强

小李

小钱